高效液相色谱仪构成 高压输液泵 色谱柱:阐发性战造备型 进样阀:六通进样阀 检测器:紫外检测器、荧光

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高效液相色谱仪构成 高压输液泵 色谱柱:阐发性战造备型 进样阀:六通进样阀 检测器:紫外检测器、荧光已关闭评论

  第二章 药物阐发中常用仪器阐发手艺 第一节 折光率取比旋光度 折 光 率 折射率 折射率又叫折光率,它是无机化合物的 主要物理之一,折光率的数值能够做为 液体纯度的标记。 根基道理 当光线自一种通明介质进入另一种通明 介质时,因为两种介质的密度分歧,光的进 行速度发生变化,从而使标的目的发生改变, 这种现象叫做折射现象,它服从折射定律。 折射定律 折射率是入射角的正弦取折射角的正弦的比值。 n=sin i/sin r n—折光率 sin i—光线的入射角的正弦 sin r—折射角的正弦 折光率(ntλ) 《中国药典》采用钠光D线测定供试 品相对于空气的折光率,除还有外,供 试品的温度应为20℃,由此测得的折光率记 为n20D 。 测定方式 折光率一般利用阿贝折光仪测定。 阿贝折光仪利用日光做为光源,镜筒中 安拆的消色棱镜可使分歧波长的折射光均集 中于钠光D线的而达到目镜。 折光仪正在利用前使用校正用棱镜或水进 行校正 。 比旋光度 根基道理 平面偏振光通过某些光学活性物质的液 体或者溶液时,偏振光的振动平面向左或向 左扭转,这种现象叫旋光现象。 偏振光扭转的角度称为旋光度。 比旋度 偏振光透过长1dm且每1ml含旋光物质1g 的溶液,正在必然的波长和温度下测得的旋光 度称为比旋度。 温度为20℃,利用钠光的D线做光源条 件下测定的比旋度记为[α]20D 。 比旋度计较方式 液体供试品:[α]20D =α/(ld) 固体供试品:[α]20D =100α/(Cl) [α]20D—比旋度 α—测得的旋光度 l —测定管长度(dm) d —液体的相对密度 C —供试品溶液的浓度(g/100ml) 旋光度的测定方式 将测定管用供试液体或固体物质的溶液 冲刷数次,慢慢注入供试液体或溶液适量, 置于旋光计内检测读数,既得供试溶液的旋 光度。用同法读取旋光度3次,取3次的平均 数,既得测定的旋光度值。 比旋度的使用 1、比旋度的测定 2、正在杂质查抄中的使用 3、正在含量测定中的使用 第二节 紫外-可见分光光度法 – 相关定义 光是电磁波,分歧波长的光具有分歧的能量。 物质接收紫外和可见光区的电磁波而发生的吸 收光谱称为紫外-可见接收光谱。 操纵紫外-可见接收光谱进行定性和定量阐发的 方式称为紫外-可见分光光度法。 根基道理 的价电子接收了光的能量,由低能 量的基态改变为高能量的激发态的过程称为 跃迁。发生跃迁的需要前提是光子所供给的 能量正好取跃迁所需的能量相当,紫外光和 可见光所具有的能量,刚好能满脚电子正在不 同电子能级之间的跃迁。 操纵紫外-可见接收光谱定性阐发 分歧布局的物质能级差分歧,能够 发生分歧的紫外-可见接收光谱,据此能够对 物质进行定性阐发。 操纵紫外-可见接收光谱定量阐发 郎伯-比尔定律 郎伯 比尔定律: 比尔定律 A=-lg T =-lg I/I0=ECL A—接收度 T —透光率 E —接收系数 C —被测物质溶液的浓度 L —光长度 E取C的关系 C(“ mol/L ”)—E(摩尔接收系数,ε) C(“g/100ml ”)—E(百分接收系数,E1%1cm) 紫外分光光度计 光源 单色器 接收池 检测器 数据记实和处置 紫外-可见分光光谱的使用 1、正在辨别中的使用 (1)对比接收光谱特征参数; (2)比力接收度比值的分歧性; (3)对比接收光谱的分歧性。 2、正在杂质查抄中的使用 3、正在含量测定中的使用 (1)对照品比力法; (2)接收系数法; (3)计较分光光度法。 对照品比力法 Cx=(Ax/AR)CR Cx—供试品溶液的浓度 CR—对照品溶液的浓度 Ax —供试品溶液的接收度 AR —对照品溶液的接收度 接收系数法 C=A/(E1%1cm·L) 计较分光光度法 将分光光度法测得的接收度进行恰当的 数学处置,以获得供试品中待测物质的量, 如:双波长分光光度法、导数光谱法等。计 算分光光度法次要用于消弭样品中干扰组分 的干扰。 第三节 红外接收光谱法 相关定义 物质接收波数位于4000~400cm-1范 围的红外光而发生的接收光谱称为红外接收 光谱。 操纵红外接收光谱对物质进行阐发的方 法称为红外分光光度法(缩写为IR)。 根基道理 红外光谱是由的振动、动弹能级引 起的光谱。 振动过程中,若的偶极矩发生变化, 则响应的振动称为红外活性振动,红外活性 振动发生接收峰。 没有偶极矩变化的振动称为红外非活性 振动,红外非活性振动不发生接收峰。 红外接收光谱 持续改变辐射红外光的波数,记实红外光 的透光率,就获得了物质的红外接收光谱; 红外接收光谱又称的振-转光谱。 分歧具有分歧的振动、动弹形式和能 级,因此具有分歧的红外接收光谱,据此可进 行物质的定性阐发。 红外光谱图 一张红外光谱图按其特征大致分为特征区和指纹 区。 特征区的接收峰由一些常见的基团或化学键的振 动发生,具有峰位恒定、峰相对稀少、易于辨认和归 属的特点。 指纹区内的峰,来历多,既有化学键的伸缩振动 接收、弯曲振动接收,又有泛頻峰等弱接收,这些峰 峰位集中,强度变化大,不易归属,但对特定化合物, 该区域具有人指纹一样的特征性。 红外光谱仪 光源 接收池 单色器 检测器 数据记实和处置 红外光谱使用 1、正在辨别中的使用 2、正在查抄中的使用 第四节 气相色谱阐发法 相关定义 色谱法是一种物理或物理化学分手阐发 方式。它先将夹杂物中各组分分手,尔后逐 个阐发,因而是阐发夹杂物最无力的手段。 色谱法具有高活络度、高选择性、高效 能、阐发速度快及使用普遍等长处。 色谱法分类 1、按流动相取固定相的堆积形态分类: (1)气相色谱法、液相色谱法 (2)气-固色谱法、气-液色谱法 液-固色谱法、液-液色谱法 2、按操做形式分类: 柱色谱法、平面色谱法、电泳法等 3、按分手机制分类: 分派色谱法、吸附色谱法、离子互换色谱法 空间排阻色谱法及亲和色谱法 气相色谱法 以气体为流动相的色谱法称为气相色谱 法(简称GC)。 气相色谱法具有分手效能高、活络度高、 样品用量少、阐发速度快等长处,但受样品 蒸汽压,不合用于难挥发和热不变性差 的物质的阐发。 气相色谱法根基道理 样品中各组分正在固定相取载气间分派, 因为各组分的分派系数不等,它们将按分派 系数大小的挨次顺次被载气带超卓谱柱。分 配系数小的组分先流出,分派系数大的后流 出。 气相色谱法相关概念和术语 1、基线:当没有组分进入检测器是,色谱流出曲线 是一条只反映仪器噪声随时间变化的曲线、色谱图和色谱峰:色谱响应信号随时间的变化曲 线称为色谱图。流出曲线上的突起部门称为色谱峰。 3、保留值:是用来描述各组分色谱峰正在色谱图中的 。 色谱峰 一般色谱峰:对称型正态分布曲线。 纷歧般色谱峰:前伸峰、拖尾峰和分叉峰。 色谱峰相关参数 峰 高(h):指峰顶到基线的距离。 ) 峰面积( ) 峰面积(A):指每个组分的流出曲线取基线间所 包抄的面积。 峰 宽:指色谱峰两侧拐点处所做的切线取峰底相 交两点之间的距离。正在峰高1/2处的峰宽称为半峰宽 (W1/2)。 保留值相关概念 (1)死 时 间(tM):从进样起头到惰性组分从柱中流出,呈现浓度极 大值所需要的时间。 (2)保留时间(tR):从进样起头到某个组分色谱峰极点的时间间隔称 为该组分的保留时间。 (3)调整保留时间(t’R):扣除死时间后的保留时间。 (4)死 体 积(VM):色谱柱正在填充后柱管内固定相颗粒间所残剩的 空间、色谱仪中管和毗连头间的空间以及检测器的空间的总和。 (5)保留体积(VR):流动相照顾样品进入色谱柱,从进样起头到柱 后某个样品组分呈现浓度极大值时,所通过流动相的体积。 (6)调整保留体积(V’R):指扣除死体积后的保留体积。 (7)保留指数(I):用以暗示化合物正在必然温度下正在某种固定液上的 相对保留值。 塔板理论 塔板理论是把色谱柱看做一个分馏塔,正在每个 塔板内,样品正在气液两相中达到分派均衡,颠末多 次的分派均衡后,分派系数小的组分先达到塔顶。 因为色谱柱的塔板相当多,因而分派系数有细小的 不同即可实现分手。 塔板理论的假设现实上是把组分正在两相间的连 续性转移过程,分化为间歇的正在单个塔板中的分派 均衡过程,也就是用分手过程的分化动做来申明色 谱过程。 塔板理论相关方程 理论塔板数、半峰宽和保留时间的关系: n=5.54(tR/W1/2)2 理论塔板高度可由柱长和理论塔板数计较: H=L/n 气相色谱仪 气源 进样及汽化系统 色谱柱和柱温箱 检测器 气相色谱仪检测器 检测器类型: 1、热导检测器(TCD) 2、电子捕捉检测器(ECD) 3、氢焰离子化检测器(FID) 检测器机能的要求: 1、活络度高; 2、不变性好,乐音低; 3、线、死体积小,响应快。 气相色谱的使用 1、正在辨别中的使用 2、正在查抄中的使用 3、正在含量测定中的使用: 气相色谱正在查抄中的使用 (1)内标法加校正因子测定供试品中某个杂质的含量: 按,细密称(量)取对照品和内标物质配成溶液, 细密量取各溶液,配成校正因子测定用的对照溶液。取必然 量注入仪器中,记实色谱图,按下式计较校正因子: 校正因子(f)=(As/Cs)/(AR/CR) As-内标物质的峰面积或峰高、AR-对照品的峰面积或峰高 Cs-内标物质的浓度、CR-对照品的浓度 再取各品种项下含有内标物质的供试品溶液,注入仪器, 记实色谱图,按下式计较含量: 含量(Cx)=f Ax /(As/Cs) Ax-供试品中待测成分或某个杂质的峰面积或峰高 Cx-供试品中待测成分或某个杂质的浓度 气相色谱正在查抄中的使用 (2)外标法测定供试品中某个杂质或从成分含量: 按各品种项下的,细密称(量)取对照品 和供试品,配成溶液,别离细密取必然量,注入仪 器,记实色谱图。丈量对照品和供试品待测成分的 峰面积或峰高,按下式计较含量: 含量(Cx)=CR(Ax/AR) 气相色谱正在查抄中的使用 (3)加校正因子的从成分本身对照法: 按,细密称(量)取杂质对照品和待测成分对照品 适量,配制测定杂质校正因子的溶液,进样,记实色谱图, 按(1)法计较杂质的校正因子。 1 测定杂质含量时,按各品种项下的杂质限度,将供 试品溶液稀释成取杂质限度相当的溶液做为对照溶液,进样, 调理仪器的活络度或进样量,然后,取供试品溶液和对照品 溶液适量,别离进样,丈量供试品溶液色谱图上各杂质的峰 面积,别离乘以响应的校正因子后取对照溶液从成分的峰面 积比力,依法计较各杂质含量。 气相色谱正在查抄中的使用 (4)不加校正因子和从成分本身对照法: 当没有杂质对照品时,可采用不加校正因子的 从成分本身对照法,按照(3)中方式配制对照溶液 并调理仪器活络度后,取供试品溶液和对照溶液适 量,别离进样,丈量供试品溶液色谱图上各杂质的 峰面积,并取对照溶液从成分的峰面积比力,计较 杂质含量。 气相色谱正在查抄中的使用 (5)面积归一化法: 测定各杂质峰的面积和色谱图上除溶剂峰以外 的总色谱峰面积,计较各杂质峰面积占总峰面积的 百分率,应合适。因为峰面积归一化法误差较 大,因而,凡是只能用于粗略调查供试品中的杂质 含量。 气相色谱正在含量测定中的使用 (1)外标法: 按照峰面积取测定组分的量成反比计较含量的方式。 (2)内标法: 选定一内标物质,插手待测样品溶液中,按照待测样品 和内标溶液响应信号的比值取待测样品的浓度成反比的关系 来定量。 对内标物质的要求是: 1、必需是原样品中不含有的组分; 2、其保留时间取待测组分附近,可是能完全分手; 3、必需是纯度合乎要求的纯物质; 第五节 高效液相色谱法 高效液相色谱法分类 1、吸附色谱法:固定相为固体吸附剂的高效液相色谱法。 2、分派色谱法:流动相和固定相是互不相溶的两种液体, 组分正在两相间分派,因分派系数分歧而被分手的高效液相色 谱法。 (1)正相色谱法:流动相极性小于固定相极性的分派色 谱法称为正相分派色谱法,简称正相色谱法。 (2)反相色谱法:流动相极性大于固定相极性的分派色 谱法称为反相分派色谱法,简称反相色谱法。 (3)反相离子对色谱法:是把离子对试剂插手极性流动 相中,被阐发离子正在流动相中取离子对试剂生成不带电荷的 中性离子对,从而添加正在非极性固定相中的消融度,使分派 系数增大,改善分手结果。 (4)离子色谱法:是通过调整流动相的PH值, 组分的解离,添加它正在非极性固定相中的消融度。 高效液相色谱法中常用固定相 1、硅胶: 表孔硅胶、无定形全多孔硅胶、球形全多孔硅胶、堆积硅珠 2、化学键合相: 通过化学反映将固定液的官能团合正在载体概况,所构成 的填料称为化学键合相,简称键合相。 (1)非极性键合相:用于反相色谱。 (2)极性键合相:用于正相色谱和反相色谱。 3、键合型离子互换剂: 以全多孔球形硅胶或无定形硅胶为基体,其概况别离键 合所需的离子互换基团。 高效液相色谱仪构成 高压输液泵 色谱柱:阐发性和制备型 进样阀:六通进样阀 检测器:紫外检测器、荧光检测器、差示折光检测 器及电化学检测器 高效液相色谱法的使用 1、正在辨别中的使用 2、正在杂质查抄中的使用 3、正在含量测定中的使用 气相色谱取质谱联用 将两种或两种以上的方式连系起来的技 术称为联用手艺。 次要有:景象形象色谱-质谱(GC-MS)、液 GC-MS 相色谱-质谱(LC-MS)、气相色谱-傅里叶变 换红外光谱(GC-FTIR)以及色谱色谱等联 用手艺手段。

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